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文章背景簡介

BACKGROUND INTRODUCTION

由于霉菌毒素污染的普遍性和嚴(yán)重后果，開發(fā)沒有昂貴儀器和專門技術(shù)人員的廉價檢測平臺來進行高通量霉菌毒素分析，具有十分重要的意義。由于酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）具有簡單、成本低、效率高等優(yōu)點，且可以肉眼觀察讀出信號，是一種很有前途的方法。但傳統(tǒng)ELISA靈敏度較低，并不適用于在資源受限的區(qū)域進行肉眼現(xiàn)場檢測。

金納米粒子（AuNPs）具有高消光系數(shù)、獨特的局域表面等離子體共振（LSPR）特性，產(chǎn)生的比色信號比傳統(tǒng)的ELISA方法靈敏得多。聚合誘導(dǎo)的AuNPs LSPR變化總是導(dǎo)致明顯的顏色對比變化，其范圍可從紅色到藍(lán)色，極易被肉眼識別。此外，比對傳統(tǒng)ELISA，等離子體酶聯(lián)免疫吸附試驗（pELISA）具有高通量、高靈敏度等優(yōu)點，已經(jīng)引起了人們的廣泛關(guān)注。但是在pELISA平臺的開發(fā)中，利用酶催化來觸發(fā)AuNP聚合仍然是一個挑戰(zhàn)。目前僅有堿性磷酸酶、乙酰膽堿酯酶、葡萄糖氧化酶等幾種酶在免疫檢測平臺中被成功用于引發(fā)AuNP聚集。其中過氧化氫（H2O2）是多種酶催化的通用底物或產(chǎn)物，因此H2O2誘導(dǎo)的AuNP聚合具有多用途。

2018年8月，南昌大學(xué)XiruiChen等人在《Talanta》（IF＝ 4．916，化學(xué)2區(qū)）上發(fā)表了題為“A colorimetric immunoassay based on glucose oxidase－induced AuNP aggregation for the detection of fumonisin B1”的論文。提出了一種新的pELISA來檢測伏馬菌素B1 （FB1）的方法，通過結(jié)合酪胺的h2o2介導(dǎo)的苯酚聚合以及AuNP與酪胺之間的強靜電相互作用，可以誘導(dǎo)AuNP的聚集，從而可以進行肉眼觀察。

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所用到的主要方法

METHODS

（1）紫外－可見分光光度法

（2）透射電子顯微鏡

（3）等離子體酶聯(lián)免疫吸附試驗

（4）高效液相色譜－熒光檢測

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文章主要內(nèi)容摘要

ABSTRACT

在資源有限地區(qū)進行高通量篩選檢測和現(xiàn)場診斷時，裸眼比色法檢測具有廣闊的應(yīng)用前景。本文開發(fā)了一種新的直接競爭的等離子體酶聯(lián)免疫吸附法（dc－pELISA）用于檢測伏伏菌素B1（FB1），該方法基于金納米顆粒（AuNP）聚合，具有高靈敏度和強的裸眼讀出信號。通過辣根過氧化物酶（HRP）／過氧化氫（H2O2）／酪胺（TYR）體系誘導(dǎo)AuNP聚合，導(dǎo)致了從紅色到藍(lán)色的明顯變化。在該體系中，通過葡萄糖氧化酶（GOX）介導(dǎo)的葡萄糖氧化反應(yīng)產(chǎn)生H2O2，使用FB1－GOX作為競爭性抗原。所建立的pELISA對fb1在3．125 ng／mL 到25 ng／mL 之間有很好的線性檢測，顏色由深藍(lán)變?yōu)榧t色，肉眼觀察的截止限為12．5 ng／mL。添加fb1的玉米樣品平均回收率為76．5％ ～ 96．8％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4．88～ 16．4％。同時，該方法與傳統(tǒng)的ELISA方法在盲檢方面有很好的一致性（R2＝ 0．927）。此外，該方法對fb1玉米樣品的測定結(jié)果與超高效液相色譜法的測定結(jié)果也有很高的一致性。這些結(jié)果表明：本文提出的比色法ELISA在定量檢測玉米樣品中的FB1時，具有很好的準(zhǔn)確度和精密度。