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前言

在過(guò)去的十幾年中，T細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)（ICP）的發(fā)現(xiàn)以及CTLA－4和PD－1／PD－L1單克隆抗體抑制劑的開(kāi)發(fā)徹底改變了免疫腫瘤學(xué)領(lǐng)域。然而，由于腫瘤抵抗、缺乏腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）和抑制性髓系細(xì)胞的存在，僅有10－30％的患者表現(xiàn)出長(zhǎng)期，持久的反應(yīng)，這些廣泛使用的ICI的響應(yīng)頻率并不理想。此外，免疫相關(guān)不良事件（IRAE）的發(fā)生和獲得性耐藥也是巨大的障礙。因此，尋找新的與腫瘤微環(huán)境相關(guān)的其他免疫檢查點(diǎn)稱(chēng)為解決這些問(wèn)題的方向之一。

目前，負(fù)調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫反應(yīng)的抑制性ICP的列表正在增加。在這些新一代ICP中，淋巴細(xì)胞激活基因－3（LAG－3）已成為癌癥治療中最有前景和潛力的靶點(diǎn)之一。在目前進(jìn)行的臨床評(píng)估中，針對(duì)LAG－3的阻斷性單抗和雙抗多達(dá)22種。根據(jù)目前已有的臨床結(jié)果，可以肯定的是，LAG－3與PD－1在促進(jìn)癌細(xì)胞免疫逃逸方面表現(xiàn)出顯著的協(xié)同作用。由于LAG3與PD－1在機(jī)制上的互補(bǔ)性，LAG3聯(lián)合PD－1已成為重要的腫瘤免疫治療策略。

LAG－3的分子特性

LAG－3是一種Ⅰ型跨膜蛋白，具有四個(gè)Ig樣結(jié)構(gòu)域（D1－D4）。LAG－3的D1由9條β－鏈組成，它們被稱(chēng)為A、B、C、C＇、C”、D、E、F和G鏈。大約30個(gè)氨基酸的附加序列位于C和C＇鏈之間，形成一個(gè)環(huán)，稱(chēng)為“額外環(huán)”。盡管序列相似性較低，但在人和小鼠LAG－3中都可以觀察到這個(gè)環(huán)，據(jù)報(bào)道此環(huán)參與了LAG－3和主要組織相容性復(fù)合體II類(lèi)（MHCII）之間的關(guān)聯(lián)。此外，LAG－3高度糖基化，在D2－D4中存在多個(gè)N－糖基化位點(diǎn)。Galectin－3和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞凝集素（LSECtin）被認(rèn)為與LAG－3聚糖存在相互作用。

LAG－3的D4和跨膜區(qū)之間的存在一個(gè)較長(zhǎng)的氨基酸序列稱(chēng)為“連接肽”�；�于小鼠模型，發(fā)現(xiàn)金屬蛋白酶ADAM10和ADAM17可以在CP處裂解LAG－3，并以可溶性形式釋放LAG－3胞外區(qū)域。因此，ADAM10和ADAM17可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞表面LAG－3的數(shù)量來(lái)調(diào)節(jié)LAG－3的抑制作用。人與小鼠CP的氨基酸序列同源性較低，因此人類(lèi)LAG－3是否也能被這些金屬蛋白酶裂解，還有待進(jìn)一步研究。

LAG－3的胞內(nèi)區(qū)由大約60個(gè)氨基酸殘基組成，缺乏典型的抑制基序，如免疫受體基于酪氨酸的抑制基序。然而，它包含幾個(gè)氨基酸序列，這些氨基酸序列在不同的LAG－3物種中非常保守，而不與其他抑制性共受體共享。這些序列包括并列膜區(qū)的FSAL，中部區(qū)域的KIEELE，10－15個(gè)谷氨酸串聯(lián)重復(fù)序列，以及在C末端區(qū)域的傾向但不限于的脯氨酸（EX－repeat）。LAG－3抑制T細(xì)胞活化需要細(xì)胞內(nèi)區(qū)域的信號(hào)傳遞，它可以通過(guò)這些序列傳遞不同的抑制信號(hào)。

LAG－3的表達(dá)和配體

與PD－1和CTLA－4一樣，LAG－3在原始T細(xì)胞上不表達(dá)，但在抗原刺激下可在CD4＋和CD8＋T細(xì)胞上誘導(dǎo)表達(dá)。LAG－3在具有抑制功能的CD4＋T細(xì)胞亞群中也有表達(dá)。Foxp3＋調(diào)節(jié)性T（Treg）細(xì)胞結(jié)構(gòu)性地表達(dá)LAG－3。

LAG－3在CD3＋CD4－CD8－T細(xì)胞、TCRαβCD8αα上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞、γδT細(xì)胞和NKT細(xì)胞上也有表達(dá)，據(jù)報(bào)道，其在活化NK細(xì)胞上的表達(dá)參與了對(duì)小鼠MHCI陰性靶細(xì)胞的殺傷作用。漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞和活化B細(xì)胞也在其細(xì)胞表面表達(dá)LAG－3。然而，LAG－3在這些細(xì)胞中的功能作用仍然知之甚少。此外，據(jù)報(bào)道LAG－3在神經(jīng)元上也有表達(dá)，并作為α－突觸核蛋白纖維的受體。

LAG－3區(qū)分pMHCII的構(gòu)象并選擇性地與穩(wěn)定的pMHCII結(jié)合。除了穩(wěn)定的pMHCII外，還有其他幾種分子被報(bào)道為L(zhǎng)AG－3的可能配體。galectin－3和LSECtin已被證明與LAG－3上的聚糖相互作用。Galectin－3屬于Galectin家族，是一種由多種腫瘤細(xì)胞和腫瘤間質(zhì)細(xì)胞分泌的可溶性半乳糖結(jié)合凝集素。LSECtin是C型凝集素家族的一員，主要在肝臟中表達(dá)。

除了免疫抑制作用外，LAG－3似乎在神經(jīng)系統(tǒng)中也有明顯的作用。Mao等人報(bào)道LAG－3可以與α－突觸核蛋白纖維結(jié)合，這與帕金森病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。α－突觸核蛋白纖維與LAG－3的結(jié)合觸發(fā)了α－突觸核蛋白纖維的內(nèi)吞作用、細(xì)胞間傳遞和神經(jīng)毒性。

LAG－3免疫抑制作用

一直以來(lái)，腫瘤中LAG－3表達(dá)水平和LAG－3＋細(xì)胞浸潤(rùn)與腫瘤進(jìn)展、預(yù)后不良和各種類(lèi)型的人類(lèi)腫瘤相關(guān)。這些結(jié)果強(qiáng)烈表明，LAG－3參與了類(lèi)似PD－1的腫瘤免疫逃逸機(jī)制。

然而，LAG－3的確切信號(hào)通路仍然未知。已經(jīng)證明，LAG－3的抑制作用并不是由與CD4的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合pMHC II引起的。有研究報(bào)告稱(chēng)，LAG－3可能是通過(guò)存在于膜近端區(qū)域的FXXL基序與C－末端的EX－repeat協(xié)同誘導(dǎo)抑制機(jī)制。在敲除EX重復(fù)序列或在FXXL序列中誘導(dǎo)突變時(shí)，LAG－3的抑制作用消失。LAG－3是如何與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)蛋白的作用機(jī)制，仍然有許多未知。

研究表明，LAG－3可以在活化的CD8＋T細(xì)胞上傳遞抑制信號(hào)。此外，TME中的Treg通過(guò)下調(diào)炎性細(xì)胞因子和上調(diào)抑制活性來(lái)削弱腫瘤特異性免疫反應(yīng)，而LAG－3已被證明在支持Treg活動(dòng)方面至關(guān)重要。對(duì)非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者的研究顯示，與外周血和正常組織中的Treg相比，腫瘤中的Treg表達(dá)LAG－3升高。

另外，樹(shù)突狀細(xì)胞表面LAG－3的表達(dá)可增加免疫抑制性細(xì)胞因子的分泌，如IL－10和TGF－β。這些細(xì)胞因子對(duì)CD8＋T細(xì)胞、NK細(xì)胞和DC的活性產(chǎn)生抑制作用。此外，Treg通過(guò)LAG－3–pMHC II相互作用直接抑制pDC。這些都會(huì)啟動(dòng)抑制途徑，阻礙DC的增殖和成熟。

LAG－3在活化的NK細(xì)胞上表達(dá)的直接作用尚不完全清楚。然而，在同時(shí)表達(dá)NK受體和T細(xì)胞受體的NKT細(xì)胞上，LAG－3已顯示出下調(diào)其增殖的作用。B細(xì)胞上LAG－3的表達(dá)已被證明是T細(xì)胞依賴性的，通過(guò)產(chǎn)生IL－10發(fā)揮免疫抑制活性。此外， LAG－3在TAMs中也有表達(dá)，盡管作用尚不完全清楚，但可以推測(cè)TAM上的LAG－3表達(dá)有助于其腫瘤促進(jìn)功能。

LAG－3的臨床開(kāi)發(fā)

基于臨床前的觀察，尤其是與針對(duì)PD－1的藥物聯(lián)合使用帶來(lái)的益處。到目前為止，已經(jīng)開(kāi)發(fā)出至少20種針對(duì)LAG－3的藥物。包括抗LAG－3阻斷性抗體（relatlimab（BMS－986016）、Sym022、TSR－033、REGN3767、LAG525、INCAGN2385－101、MK－4280和BI754111）以及拮抗雙特異性抗體（MGD013（抗PD－1／LAG－3）、FS118（Anti－LAG－3／PD－L1）和XmAb22841 （anti－CTLA－4／LAG－3））等。

其他LAG－3靶向藥物也被用于癌癥治療。IMP321是一種可溶性重組融合蛋白，由LAG－3的胞外區(qū)和IgG的Fc區(qū)組成，通過(guò)MHCII介導(dǎo)反向信號(hào)激活抗原提呈細(xì)胞，導(dǎo)致IL－12和TNF的增加，CD80和CD86的上調(diào)。在目前進(jìn)行的臨床試驗(yàn)中，IMP321單藥治療或與其他療法聯(lián)合治療的療效一般。通過(guò)MHCII反向信號(hào)的細(xì)節(jié)仍然未知，需要仔細(xì)研究。

抗－LAG－3消耗抗體（GSK2831781）和激動(dòng)劑抗體（IMP761）作為治療自身免疫性疾病的潛在治療劑也有報(bào)道。盡管這些抗體旨在清除或抑制致病性T細(xì)胞，但它們也可能消耗或抑制Treg細(xì)胞。進(jìn)一步的研究闡明這種抗體的功能以及LAG－3的生物學(xué)特性有望促進(jìn)其發(fā)展。

小結(jié)

靶向抑制性協(xié)同受體PD－1和CTLA－4的檢查點(diǎn)免疫療法徹底改變了癌癥治療，而LAG－3作為新一代發(fā)現(xiàn)的抑制性檢查點(diǎn)，有望成為腫瘤治療中極具前景的靶點(diǎn)。然而，我們對(duì)LAG－3的理解仍然非常有限，許多基本問(wèn)題仍然沒(méi)有得到解答。LAG－3的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制尚不清楚，其配體也很復(fù)雜。LAG－3在多種細(xì)胞中表達(dá)，然而，LAG－3的功能以及LAG－3阻斷劑在每種類(lèi)型細(xì)胞中的作用尚未闡明。我們還需要研究LAG－3和其他共受體的功能差異、冗余和協(xié)同作用。通過(guò)更詳細(xì)地闡明LAG－3的功能特性，我們才可以合理地設(shè)計(jì)LAG－3靶向治療各種疾病，如癌癥和自身免疫疾病。

參考文獻(xiàn)：

1． LAG－3： from molecular functions to clinical applications． J Immunother Cancer． 2020 Sep；8（2）：e001014．

2． The Next－Generation Immune Checkpoint LAG－3 and Its Therapeutic Potentialin Oncology： Third Time’s a Charm． Int J Mol Sci． 2021 Jan； 22（1）： 75．

       原文標(biāo)題 : 靶向LAG-3的腫瘤免疫治療研究進(jìn)展